新手来求助。多肽固相合成的诸多问题。请各位老师移步进来，指导一下，谢谢

新手第一次做多肽固相合成。请各位老师耐心的指导一下，谢谢。

1.HBTU/HOBt/DIEA作为缩合剂。可否提前将HBTU/HOBt用DMF一起溶解到容量瓶中（尽管很难溶，需要用超声），配成0.5M的HBTU/HOBt的DMF溶液，反应中，按摩尔数换作成相应体积取用？ 因为我看到某资料上说，可以混配，而且室温下可以存放6个月左右。

2.如果可以配成混合溶液使用，是不是需要棕色细口瓶贮存，并保证密闭。如果真进入水气或极少量的水的话，还能用么？缩合反应是不是要求无水的？

3.Chloranil检测方法跟Kaiser法，哪个方法更好一些？后者我没试过，因为后者要用到KCN。不过前者我试了一下，大约十分钟，如果有游离氨基，就会显蓝色。

4.Pro如果在靠近树脂一端，即C端的第二位，用Wang树脂，是不是也会发生DKP反应？

5. Fmoc脱保护反应（20%PIP/DMF）。反应时间有长有短，有的5min，有的30min，有的则是反应5min，抽滤，再加入等量的脱保护剂继续反应15min（固相合成），这里面有什么讲究么？另外脱保护剂的加量有没有什么要求，一般是按多少来加的？有的书上提到，只要脱保护剂，没过树脂即可。
另外，脱保护对无水的要求高么？

6.切肽后，有文献说，旋到四分之一体积，再加10倍冰乙醚沉淀，离心；有的人则说，需要旋到基本没有TFA出来，成油状物，再加冰乙醚。这二者有没有明显的区别？如果选用后面的方法，加冰乙醚的体积，是不是应该是油状物的体积的10倍？

7.如果我固相合成完的多肽，从树脂上切下后，再用冰乙醚沉淀，离心出来。如果不纯化，是不是我的产品就是这个多肽的TFA盐，对吧？如果想转成醋酸盐，一般用什么方法来转？
这个多肽与TFA（醋酸）之间是离子键，还是共价键，还是较强的氢键？

回答：

1. 关于1
   如果不是合成仪，最好现用现加，另外也不用预先配成溶液，直接投料再加溶剂即可

2. 1.配置溶液可以，不过最好一个礼拜换一下！夏天估计一个礼拜都不行！
   2.pro 用CTC树脂，wang 树脂DKP太严重，收率几乎没有！
   3.你用茚三酮溶液就可以检测，120° 2到3分钟即可，提高生产效率
   4.脱Fmoc，20%哌啶/DMF 30min 也有，5+15也有！至于5分钟，时间太短！
   5.切割多肽，最后还是用离心机分离，这样效率高，离心机实在分离不出来的时候，那只能用旋转蒸发仪旋蒸出来！
   6.至于转盐这个问题，你做合成出来交给纯化转盐就是！你不会又合成又纯化吧！那太没效率 了！

3. 8，DIPEA不会把Fmoc保护基脱掉
   7，纯不纯化都是TFA盐，可用离职交换树脂转盐
   6，固相的话切割后不需要旋干直接加入乙醚析出，加的量看你做了多少量适当的加
   5，一般都是反应5min后抽滤，然后再加入脱保护试剂再反应10min这样Fmoc基本就会脱出完全，对水的要求不是很高
   4，基本不会

4. 1  可以 但你不觉得麻烦吗 直接称固体多好
   2 缩合过程最好无水 进去点也还好 但CTC树脂最好一点水都不要见
   3 Kaiser法就行 不加KCN也可以 就是检测时间稍长 5min就可以
   4 不会
   5 脱保护时间5+15 就行 两次10min也行，都行。脱保护没那么难，反应很快。
   6 体积不大不用旋蒸 直接加冰乙醚就行，你谁那两种没有明显区别，一个样。
   7 是TFA盐 可以用C18柱脱盐，或换盐，也可以用离子交换，还可以用半透膜，都可以。
   8 DIEA不会脱保护

5. 1.配成溶液的，看有没变色！一般我们生产溶液变色严重了，就不考虑使用了。配成溶液的，一般都是手工批量几十条操作才考虑啊。不然还是直接称取好了！
   2.树脂选择一般C端是C.H,P那我们一般使用CTC resin ！C端要酰胺化的，就使用 Rink Amide MBHA Resin ,剩下差不多就是Wang 了!
   3,是的，苯酚-乙醇溶解不加也影响不大，不过还有个吡啶一定要加，最好是重蒸吡啶！
   4.过夜反应没问题的！大冬天的，大家过夜反应也都是低温反应上的！

6. 1.以后还是要用合成仪的，所以尝试混配，另外做小量反应，每次都称重，误差还是会相对大一点的。
   2.还好暂时用不着2氯树脂；
   3.KAISER法，以后会试一下。
   4.我看书上提到这个问题。
   8.这个其实就是瞎想一下。想在液相中，做一个C端修饰。所以问一下DIEA会不会脱保护，如果不能脱，还得用PIP

7. 我第一次做多肽固相合成，以后还得多麻烦你了。
   1.。。。我配多了。看一份英文资料上说，室温下6个月都没问题。我就配了50mL的。弄不好现在棕瓶里的，已经变质了。。。
   2.嗯，那我就直接用AM树脂吧，本想用Wang树脂试试来着，看来基本没希望了。
   3.你的意思是说，直接配成5%茚三酮-乙醇 120度2~3分钟就可以是么？还用不用再加80%苯酚-乙醇呢？
   4.因为我们实验室没空调，暖气也不好，室温真TM的稳定，12+-1度，都无语了。那如果Fmoc-Gly-OH过夜反应，能反应完全么？我想做个Fmoc标曲，又没DBF的标准品。