UPLC-HRMS代谢组分析

从P.longicirrum的乙醇提取物中分析可溶于乙酸乙酯的有机化合物。通过真空液相色谱（VLC）在反相材料上实现第一次分级，得到11个级分。这些的1 H NMR分析表明在主要级分3-8中存在化学上不同的次级代谢物，而亲水级分1和2仅含有糖和亲脂性的，即9-11个简单脂质。

因此用VLC级分3-8进行详细的UPLC-HRMS研究。得到的UPLC色谱图（支持信息文件1，图S47-52）非常复杂，给人以这种动物的多面代谢组的印象。大部分（除4和17随后分离和表征的次级代谢产物）（1 - 19，图1）可以被分配给检测到的米 / ž值（支持信息文件1，表S7A），例如，突出的MS数据为与分子量为362 Da的代谢物的存在有关，涉及4-氧杂硫杂环丁烷（16）或1-氧代-9-氢异硫氰酸（18）。在VLC 5和6的色谱图中保留时间约为14分钟的峰包含代谢物，其显示m / z为319.23（M + H）和341.21（M + Na），这表明存在具有分子量的双环氧化物12 318.45 Da。质量比为475.39（M + H-H 2 O）和493.39（M + H），对于VLC级分7的UPLC-色谱图的保留时间为14.7分钟的峰，发现了类固醇1的特征。或多羟基化的类固醇4，两者的分子量均为492Da。

更重要的是，也产生UPLC-HRMS调查与一些峰的M / Z的值不能被连接到分离的化合物1 - 19。因此，在VLC分数7和8中，m / z值为287.24（M + H）表明最可能存在分子量为286.23Da的不稳定的sarcophytonin A [16]。VLC级分7和8还含有在当前研究中无法分离的Sarcophyton软珊瑚的类固醇成分特征的m / z值，例如，m / z397.35（M + H）表明Kobayashi报告存在类固醇化合物等。来自Sarcophyton glaucum [17] 如表S7B（支持信息文件1）中所述，分子量为396Da 。在UPLC-HRMS数据的详细分析还显示存在米 / ž在VLC馏分711.39（M + H）和669.44（M + H）6个7，这些值会适合于尚未报道biscembranoids，含有化合物5作为可能的生物遗传前体，建议分子量为710和668 Da（参见支持信息文件1，表S7B）。

值得注意的是出现了许多峰，其含有可归因于分离的代谢物的异构体的m / z值。除了分子量为316 Da 的isosarcophines 8和9之外，在不同色谱峰的VLC 6和7级分的色谱图中也检测到m / z值317.21（M + H）（t R：12.0,12.7,14.0） ，15.9分钟）表明存在其他可能的西松烷内酯异构体，如表S7A（支持信息文件1）所示。所述米 / ž值（M + H，739.44）归属于isobisglaucumlides B（14）和C（15）也被发现在UPLC色谱的四个不同的保留时间，表明进一步的异构体的代谢物的存在。这些发现突出了P. longicirrum惊人复杂多样的代谢组学。

关于所报告的次级代谢产物P. longicirrum 20-22，图2由科尔等人。[13]，只有分子量为304Da的化合物22导致m / z为305.25（M + H），可以存在于VLC8中（参见支持信息文件1，图S7B）。然而，从Sarcophyton spp 描述了大约20种其他的cembranoids 。分子量为304 Da，使得这一评估非常具有试验性。然而，可以说，在该研究中研究的长双歧杆菌标本要么属于不同的化学型，要么具有与Coll和同事调查的不同的食物偏好。[13]。

VLC级分5-8的重复分级分离导致一系列次级代谢物的分离，即四种类固醇1-4，九种西松烷二萜5-13和两种双联虫14和15，以及四种类似于聊天蛋白的多环二萜。16-19 [12]。化合物1和5是新的化学结构。这同样适用于双偶氮体14和15，然而它们与双甘草B和C [18]非常相似，但它们的立体化学与后者不同。由于没有关于西松烷内酯双环氧化物的立体化学特征的研究到目前为止已发布了12个，我们在此提出其相对配置。图1总结了本次调查中发现的所有代谢物。值得注意的是，Coll等人先前报道的来自P. longicirrum的西松烷二萜（参见图2，化合物20-22）。虽然UPLC-HRMS数据（见上文）表明可能存在西松烷内酯22，但未从所研究样本的复杂次级代谢组中分离[13]。

分离化合物1，为无定形白色固体。在氯仿（c 0.1）中测量比旋光度，得到[α] D 20 -21.0。通过HRMS测量建立分子式C 30 H 52 O 5，其产生分子离子的m / z 515.3694 [M + Na]。环双键当量（RDE）计算为5。IR光谱显示（在3360厘米宽带羟基基团的存在-1）和一个酮官能团（尖锐的能带在1697厘米-1）。

通过广泛的NMR实验（1 H，13 C NMR，COSY，DEPT，HSQC和HMBC（参见支持信息文件1，表S1）建立1的平面结构.13 C NMR谱显示可归因于7甲基的30个共振， 9亚甲基和8次甲基。甲13在218.4 ppm的C NMR共振证实了酮基（C-9），而伯醇部分是明显的从13 C NMR共振在δ ç 59.1（C-11）。进一步氧化碳，即，C-3，C-5和C-6产生了13个 C NMR共振在δ ç分别为68.0,80.7和75.7。根据HSQC实验中获得的相关性完成质子碳分配。对于C = C键，sp 2杂化碳不存在13 C NMR共振，并且RDE为5表明在1中存在几个环，可能是类固醇来源。后者支持特征屏蔽1个在δ1 H NMR共振ħ 0.54和δ ħ -0.05（二者DD，H 2 -30）以及在一个δ多重ħ 0.32（H-22），用于环丙基，如通常发现于gorgosterols [19,20]。

阿1 H，1个 H ^ COZY实验导致可能使用HMBC相关来结合的部分结构。自旋系统A包括H 2 -1至H 2 -4，而H-6至H-30形成自旋系统B（参见图3）。部分结构A和 上一篇文章 : 次生代谢组及其在aeolidoidean Phyllodesmium longicirrum中的防御作用 下一篇文章 : 微反应器技术和流动化学对绿色和可持续合成的发展的贡献